胸腺組織消化手冊(cè)

更新時(shí)間：2016-02-16

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Worthington組織消化指南

引言

組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細(xì)胞生物學(xué)研究的原代細(xì)胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年，但是對(duì)其組織消化和細(xì)胞收集的作用機(jī)制卻沒(méi)有全面的理解。由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機(jī)選擇或基于過(guò)去的經(jīng)驗(yàn)，而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案，以及如何根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

細(xì)胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個(gè)細(xì)胞，而影響結(jié)果的原因有很多，包括（不限于）以下：

1、組織類型

2、物種來(lái)源

3、動(dòng)物年齡

4、遺傳改造情況（如knockouts）

5、所用的消化培養(yǎng)液

6、所用的酶

7、消化酶中的雜質(zhì)

8、所用消化酶的工作濃度

9、溫度

10、孵育時(shí)間

通常前四個(gè)原因沒(méi)辦法選擇，而剩下的原因一般由經(jīng)驗(yàn)決定以獲取zui適實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

通過(guò)查閱文獻(xiàn)來(lái)選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來(lái)源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的特性，以及過(guò)去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細(xì)胞收集知識(shí)和方法，描述了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)步驟，以便于制定一個(gè)*的細(xì)胞分離方案，同時(shí)列舉了一些相關(guān)的參考文獻(xiàn)。

下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻(xiàn)，以組織類型和物種分類，詳見(jiàn)鏈接）

脂肪組織	腎上腺組織	骨組織	腦組織
軟骨組織	結(jié)腸組織	內(nèi)皮組織	上皮組織
眼	心臟	腸	腎
肝	肺	淋巴結(jié)	乳腺
其它組織	其他組織	肌組織	神經(jīng)組織
胰腺	腮腺	垂體	前列腺
生殖	動(dòng)物鱗片	皮膚	脾臟
干細(xì)胞	胸腺	甲狀腺/甲狀旁腺	扁桃體
腫瘤

注：使用Worthington公司消化酶的文獻(xiàn)不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

胸腺組織消化手冊(cè)

物種	詳細(xì)來(lái)源	細(xì)胞名稱	消化用酶	培養(yǎng)基	參考文獻(xiàn)
人類	人類	Dentritic	Collagenase Type 2: 0.1%	RPMI 1640	Vandenabeele S, Hochrein H, Mavaddat N, Winkel K, Shortman K: Human thymus contains 2 distinct dendritic cell populations, Blood 97, 1733-41, 2001
人類	人類	Dentritic	Deoxyribonuclease I: 0.002%	RPMI 1640
小鼠	小鼠	Stromal	Collagenase Type 3: 0.2%	RPMI 1640	Phillips, Joy, Brondstetter, T., English, C., Lee, H., Virts, E, and Thoman, M.: IL-7 Gene Therapy in Aging Restores Early thymopoiesis without Reversing Involution, J Immunol , 4869, 2004
小鼠	小鼠	Stromal	Hyaluronidase: 0.1%	RPMI 1640
小鼠	小鼠	Dentritic	Collagenase Type 3: 0.1%	RPMI 1640	Schiavoni, F, Mattei, F, Sestili, P, Borghi, P, Venditti, M, Morse, H, Belardelli, F, and Gabrieli, L: ICSBP is Essential for the Development of Mouse Type I Interferon-producing Cells and for the Generation and Activation of CD8a+ Dendritic Cells, J Exp Med 196, 1415, 2002
小鼠	小鼠	Dentritic	Deoxyribonuclease I: 325 u/ml	RPMI 1640
小鼠	小鼠, 3-6 周	Thymic	Collagenase Type 3: 100-400 u/ml	HBSS	Smith KM, Olson DC, Hirose R, Hanahan D: Pancreatic gene expression in rare cells of thymic medulla: evidence for functional contribution to T cell tolerance, Int Immunol 9, 1355-65, 1997
小鼠	小鼠 (BALB/c, C3H, C57BL/6), 1-28 天	Epithelial, thymus	Neutral Protease: 1.5 礸/ml	DMEM	Ropke, C., van Deurs, B., and Petersen, O.: Short-term C*tion of Murine Thymic Epithelial Cells in a Serum-Free Medium, In Vitro Cell Dev Biol 26, 671, 1990
小鼠	小鼠, C3H, 16 周大, 雌性	Epithelial	Collagenase Type 3: 0.1%	DMEM	Ehmann, U., Shiurba, R., and Peterson, W.: Long-Term Proliferation of Mouse Thymic Epithelial Cells in Culture, In Vitro Cell Dev Biol 22 (12), 738, 1986
小鼠	Swiss小鼠, 6 周	Thymus	Collagenase Type 3: 150 u/ml	DMEM	Jones, K. and Pierre, R.: Analysis of Cellular Heterogeneity in Mouse Thymus Cultures, In Vitro 17, 431, 1981
大鼠	大鼠,產(chǎn)后的	Thymic	Trypsin: 0.05%	HBSS	Bonfanti, P., Claudinot, S., Amici, A., Farley, A., Blackburn, C. and Barrandon, Y.:Microenvironmental Reprogramming of Thymic Epithelial Cells to Skin Multipotent Stem Cells.,Nature 466, 978, 2010
大鼠	大鼠	Thymic epithelial	Collagenase Type 3: 0.1%	DMEM	Masuda, A and Matsuyama, M: Epithelial Cell Lines From Rat Thymoma and Rat Thymus,Cell & Tissue Culture: Laboratory Procedures Vol. 2,Doyle, A., Griffiths, J., and Newell, D., John Wiley and Sons, Ltd., 21C:4.1, 1995
大鼠	大鼠 (ACI/NMs X BUF/Mna) F1, 雄性, 28 月	Epthelial	Collagenase Type 3: 0.1%	Eagle's MEM Serum-free	Masuda, A., Ohtsuka, K., and Matsuyama, M.: Establishment of Functional Epithelial Cell Lines from a Rat Thyoma and a Rat Thymus, In Vitro Cell Dev Biol 26, 713, 1990
	大鼠, (ACI/MNs) 雄性, 8 周
	(包括牛, 成年的)

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