creativemolecules 008TP說明書

TP1

產(chǎn)品信息Ac-TRTESTDIKRASSREADYLINKER TP1供試肽1 12 x 1 nmol

目錄號編號：008TP

配方：C119 H201 N39 O44

分子量：2880.46841

特點：通過酶處理肽內(nèi)交聯(lián)，可轉化為Lys-Lys典型的肽間交聯(lián)。
交聯(lián)產(chǎn)物收率高。
受乙酰化N端保護。
MALDI MS的優(yōu)化分子量。
供試肽Ac-TRTESTDIKRASSREADYLINKER旨在表征胺反應性交聯(lián)試劑的交聯(lián)肽產(chǎn)物。該肽含有兩個賴氨酸殘基，由于其空間接近性和通過肽N末端氨基乙酰化阻斷，可有效交聯(lián)。胰蛋白酶消化交聯(lián)肽可去除Ac-TR和ASSR肽先導物

 圖1.從TP1產(chǎn)生典型Lys-Lys肽間交聯(lián)的方案。
供試肽TP1以凍干材料的形式提供，裝于12個試管中，每個試管含有1 nmol(2.8 μg)肽。TP1的典型測試交聯(lián)反應可以以與FLAG肽的測試交聯(lián)試劑反應相似的方式進行（http://www.creativemolecules。。ｃｏｍ/FLAG%20test%20reaction%20procedure.pdf ).可在20 μL 100 mM醋酸三乙胺緩沖液(pH 7.0)(Fluka)中復溶凍干TP1，得到50 μM TP1溶液。可加入等摩爾量的交聯(lián)劑（即2 μL 0.5 mM水溶液），并允許反應混合物在25 ℃下進行30 min。可選擇加入1 μL新鮮制備的1M碳酸氫銨溶液淬滅反應。可加入1 μg胰蛋白酶(Promega)，并將混合物在37 ℃下孵育3小時。可將0.1 μL反應混合物點樣至MALDI板上，干燥，用0.1 μL基質溶液（1 mg/mLα-氰基羥基肉桂酸的0.1%三氟一酸50%乙腈溶液）覆蓋，干燥并通過MALDI MS進行分析。
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供試肽TP1可用作新交聯(lián)試劑的標準物質以及交聯(lián)實驗的對照樣品，確保在肽交聯(lián)的所有處理步驟中具有正確的性能。
與BS3-H12/D12交聯(lián)并用胰蛋白酶消化的TP1的質譜圖示例見圖2。主要交聯(lián)產(chǎn)物由死端交聯(lián)TESTDIKR-BS3-OH、EADYLINKER-BS3-OH和肽間交聯(lián)TESTDIKR-BS3-EADYLINKER表示，對應質量為1105、1406、2337 Da。
使用以下公式計算肽交聯(lián)的理論質量：[MipCL + H]+ = 949.49490 + 1250.63754 + Mip[MOHCL + H]+ = 949.49490 + MOH[MOHCL + H]+ = 1250.63754 + MOH，其中MipCL–肽間交聯(lián)的質量；MOHCL–死端質量c