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abvector ＃H15說明書

更新時間：2020-09-22

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abvector ＃H15說明書

FoldHelper™-104和FoldHelper™-104P

＃H15和＃H16

圖1. Hsp104在用FoldHelper™-104感染的昆蟲細胞中的表達。感染后60小時收獲 Spodoptera frigiperda Sf9細胞，在50 mM Tris-HCl pH 8.0、150 mM EDTA，0.5％NP-40中溶解，并通過在30,000g下離心15分鐘去除不溶級分。可溶性蛋白在11％SDS-PAGE中分離，并用考馬斯亮蘭染色。NC陰性對照桿狀病毒，不表達任何外源蛋白質或多面體蛋白（目錄號C13）。	推薦用途：與任何產生細胞質蛋白聚集體的重組桿狀病毒共感染。

	FoldHelper™-104提供酵母Hsp104（Acc＃AAA50477）的表達。Hsp104屬于分子伴侶的Hsp100 / Clp組，其可用作逆轉而不是防止蛋白質聚集的工具（Glover JR和Tkach，JM，Biochem.Cell Biol。，79：557-568，2001）。Hsp104具有重塑活性，可作用于捕獲的聚集蛋白。Hsp104需要與特別是屬于Hsp40和Hsp70家族的常規伴侶進行特定的相互作用，以促進其產生的中間體的重折疊（Glover JR和Lindquist S.，Cell，94：73-82，1998）。酵母Hsp104可以在異源系統中起作用，例如，它可以減少哺乳動物細胞中外源蛋白的聚集（Bao YP等，J.Biol.Chem。，277：12263-12269，2002）。 FoldHelper™-104P提供與FoldHelper™-104相同水平的Hsp104表達。另外，它提供了蛋白質二硫鍵異構酶（PDI）（Acc＃CAA28775）的高水平表達。已證明PDI在體外氧化蛋白折疊中是有效的（Weissman，JS和Kim PS，Nature，365：185-188，1993）。PDI具有多種功能，盡管在ER中豐富，但也存在于細胞質中（Turano，C。等，J.Cell.Physiol。，193：154-163，2002）。盡管PDI在感染了重組桿狀病毒的昆蟲細胞中具有無法解釋的作用，但令人歡迎的是PDI可以提高此類細胞的壽命。這種細胞病變效應在表達高水平PDI的受感染細胞中明顯不明顯，并且這種細胞比未提供PDI表達的對照病毒感染的細胞存活約24小時。類似地，哺乳動物細胞中PDI的過表達導致重組蛋白生產的壽命延長和時間延長（Kitchin，K和Flickinger，MC，Biotechnol.Progr。，11：565-574，1995）。如果您尚未使用桿狀病毒表達系統（也稱為桿狀病毒表達載體系統或BEVS）工作，可以在TECHNOLOGY上進行快速更新。轉到BACULOVIRUS教程有關桿狀病毒轉染，重組桿狀病毒繁殖和重組桿狀病毒蛋白表達研究的簡單在線說明。

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