Gene Link
提供的材料

儲存條件：

接收后儲存糖原和線性丙烯酰胺溶液at -20^oC 以及室溫下的所有其他溶液。

檢驗報告和產品質量標準

DNA 和 RNA 沉淀溶液是所有分子生物學實驗室的基本要求。Gene Link 使用無核酸酶水制備了一系列常見和流行的溶液，均為分子生物學級，也適用于 RNA 沉淀。

使用無核酸酶水制備糖原和線性丙烯酰胺溶液，并通過在 RNA 和 DNA 沉淀中使用核酸酶，隨后進行瓊脂糖凝膠電泳來檢測是否存在核酸酶，以確定核酸的完整性和無分解。

在無核酸酶高壓滅菌水中制備 LiCl、醋酸鈉、醋酸鉀和氯化鈉的適當摩爾濃度溶液，制備后再次高壓滅菌。在無核酸酶高壓滅菌水中制備適當摩爾濃度的乙酸銨溶液。檢測所有溶液的 DNA、RNA 和寡核苷酸沉淀。

經認證，所有溶液均不含核酸酶和核酸，并經驗證可用于 DNA 和 RNA 沉淀。需要適當的無核酸酶處理、分配和儲存條件。

在每個產品的標簽和隨附的裝箱單上注明制造批號。

產品描述和應用

DNA 和 RNA 的沉淀

經典的分子生物學程序是乙醇沉淀濃縮 DNA、RNA 和寡核苷酸。變更為使用異丙醇。本產品手冊僅限于與核酸的酒精沉淀相關的描述。另一種濃縮 DNA 和 RNA 的方法是使用硅膠珠或玻璃纖維過濾器，在離液鹽存在的情況下優先結合 DNA 和 RNA。參見Omni-Clean™該方法詳細信息的產品線。Omni-Clean™是從極稀溶液中濃縮 DNA 和 RNA，從凝膠切片中提取 DNA 和 RNA 的有效方法。

使用酒精進行 DNA 和 RNA 沉淀是基于在存在鹽的情況下鹽析的原理，使核酸優先變得不溶，并通過離心收集沉淀物。該工藝還純化了 DNA 和 RNA，留下醇溶性鹽、有機溶劑和洗滌劑。

由于磷酸二酯鍵的磷酸基團，DNA 和 RNA 的骨架帶負電荷，因此水合，易溶于中性水。加入陽離子鹽和乙醇或異丙醇可破壞水合物外殼，促進帶負電荷的磷酸基團和帶正電荷的離子之間形成離子鍵，有效中和 DNA 或 RNA 分子，導致沉淀。

乙醇與異丙醇

乙醇和異丙醇均用于核酸的沉淀。乙醇用于 DNA 和

1. -RNA 和異丙醇為 0.6 至 1 體積的 DNA 和 RNA 溶液，體積為 3。對于異丙醇，乙醇的終濃度在 60%-80% 和 30%-50% 之間變化。

異丙醇具有所需體積較小的優點，通常用于沉淀大量核酸溶液。通常，向 1 體積 DNA 溶液中加入 0.6 至 1 體積的異丙醇。較高的量對較小的 RNA 的片段有用。相比之下，2 體積乙醇是 DNA 的標準品，2.5 體積是 RNA 溶液的標準品。但是，與乙醇相比，異丙醇的缺點是共沉淀更多的鹽，揮發性更低，并且風干緩慢，增加了酒精殘留到終樣品中的風險。

載體/共沉淀劑

通過標準乙醇沉淀法，在 100-200 ng/mL 濃度下，DNA 和 RNA 沉淀相當有效，并且通常在該濃度下也可見沉淀。低于 100 ng/mL 時通常無法實現定量沉淀，此外，沉淀不可見，因此難以完成乙醇沉淀。

傳統上使用 tRNA 和糖原作為載體來幫助沉淀和顆粒的可見性。這兩種物質均來自生物來源，因此含有痕量核酸，其使用需要廣泛去除核酸和核酸酶。線性聚丙烯酰胺 (LPA) 是一種合成的惰性載體，因此不含核酸和核酸酶。

糖原和線性丙烯酰胺 (LPA) 對大多數分子生物學應用的抑制作用均極小，因此可以相當有信心地使用。

鹽

乙醇沉淀中常用的鹽是醋酸鈉、乙酸銨、氯化鈉和氯化鋰。

3M 醋酸鈉 ph5.2-5.5 溶液是大多數實驗室核酸沉淀的標準試劑。下面列出了常用鹽及一些屬性。

冷卻溫度和時間

經典的冷卻溫度為-20 ℃10-15 min，當 DNA 濃度低于 100 ng 時，這可能是選，但通常沒有必要，因為當 DNA 濃度不受限制時，沉淀發生非常迅速。

不同實驗室的沉淀冷卻時間不同，從-70 ℃、-20 ℃、0 ℃ 或室溫，持續 5 min 至過夜。對于低 DNA 濃度，可能需要長達 20 min 的離心時間才能有效回收。

在較低溫度下，酒精的粘度大大增加，可能需要離心更長時間才能有效沉淀 DNA。在-70 ℃ 孵育可提高小濃度或少量 DNA 的沉淀效率，但這些溶液應在離心前恢復至 0 ℃。

離心速度和時間

一般 12K rpm 離心 5-10 min 足以沉淀 DNA 和 RNA。較長的離心時間可有效回收低濃度核酸，但通常無需增加超過 20 min。

干燥

應注意在復溶前干燥沉淀的 DNA 和 RNA 以*蒸發乙醇或異丙醇。核酸不應過度干燥，應避免或在觀察到的足以蒸發酒精的較短持續時間內進行加熱加速真空。通常將管在工作臺上保持打開幾分鐘就足夠了。

RNA 的沉淀

RNA 沉淀通常與 DNA 相似，而應特別考慮無 RNase 處理和所有方法的性能。

選 RNA 復溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

復溶

參見Gene Link DNA&RNA 重構液[目錄號：40-3000-00]手冊。

DNA&RNA 重構液包裝內容物

目錄號：40-5014-05 RNA 復溶溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4）；50 mL 目錄號：40-3000-05 DEPC 處理水；50 mL

目錄號：40-3001-05 無核酸酶水（不含 DEPC）；50 mL 目錄號：40-5011-05 TE 緩沖液 1X 溶液 pH 7.0；50 mL

載體/共沉淀劑

糖原

糖原溶液 10 mg/mL；目錄號：40-5112-01

使用單價鹽和乙醇或異丙醇進行有效的 DNA 和 RNA 沉淀取決于其濃度。濃度低于 50 ng/mL 時，DNA 和特異性 RNA 沉淀通常無法定量，沉淀不清晰可見，導致回收率不可靠。

添加糖原或線性丙烯酰胺作為載體/共沉淀劑有助于定量回收，特別是沉淀的清晰可見性。糖原不會干擾分光光度法讀數、電泳和包括 PCR 在內的大多數分子生物學酶應用。

用途：1µL (10µg) 10 mg/mL 糖原溶液足以用于 500µL DNA 或 RNA 溶液。糖原來源：糖原是一種來源于牡蠣的高純度多糖。

規格：分子生物學級。提供的糖原溶液經驗證不含 DNase 和 RNase。糖原溶液可能含有殘余核酸。

線性丙烯酰胺

線性丙烯酰胺溶液（線性聚丙烯酰胺，LPA；5 mg/mL）；目錄號：40-5113-01

使用單價鹽和乙醇或異丙醇進行有效的 DNA 和 RNA 沉淀取決于其濃度。濃度低于 50 ng/mL 時，DNA 和特異性 RNA 沉淀通常無法定量，沉淀不清晰可見，導致回收率不可靠。

添加線性丙烯酰胺作為載體/共沉淀劑有助于定量回收，尤其是顆粒的清晰可見性。線性丙烯酰胺不干擾分光光度法讀數、電泳和包括 PCR 在內的大多數分子生物學酶應用。線性丙烯酰胺是合成的，保證不含所有核酸、dna 酶、rna 酶和蛋白酶。線性聚丙烯酰胺 [40-5113-01] 的平均分子量為 9-13 MDa。

用途：1-2µL (5-10µg) 5 mg/mL 線性丙烯酰胺 (LPA) 溶液足以用于 500µL DNA 或 RNA 溶液。線性聚丙烯酰胺顆粒未緊密粘附在微量離心管底部。去除上清液時，小心不要丟棄沉淀物。

線性丙烯酰胺 (LPA) 溶液來源：在無核酸酶分子生物學級水中制備的合成物。

規格：分子生物學級。提供的線性丙烯酰胺 (LPA) 溶液經驗證不含 DNase、RNase、蛋白酶和核酸。線性聚丙烯酰胺 [40-5113-01] 的平均分子量為 9-13 MDa。

醋酸鈉

3M 醋酸鈉 pH 5.5 DNA&RNA 沉淀溶液；目錄號：40-5132-05

醋酸鈉可沉淀蛋白質，因此，如果溶液含有大量蛋白質，應避免使用。

用途：0.3 M 醋酸鈉終濃度和 2-2.5 體積乙醇。

濃度≥20 ng/mL 時 DNA 或 RNA 的常規沉淀

1. 添加 1/10^th3 MpH 值醋酸鈉的體積 5.5.
2. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 10 min。輕輕倒出或吸取上清液。
5. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
7. 風干顆粒 5 min。
8. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸團塊。
9. 選 RNA 復溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

醋酸鉀

3M 醋酸鉀 pH 5.5 DNA&RNA 沉淀溶液；目錄號：40-5133-50

1. 醋酸鉀在 RNA 沉淀中特別有用，用于無細胞翻譯，因為它避免了鈉離子的加入。
2. 沉淀蛋白質，因此如果溶液含有大量蛋白質，應避免沉淀。
3. 避免與含 SDS 的 DNA 和 RNA 溶液一起使用。SDS 的鉀鹽極不溶。

用途：0.3 M 醋酸鉀終濃度和 2-2.5 體積乙醇。

濃度≥20 ng/mL 時 DNA 或 RNA 的常規沉淀

1. 添加 1/10^th3 M 醋酸鉀 pH 值的體積 5.5.
2. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 10 min。輕輕倒出或吸取上清液。
5. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
7. 風干顆粒 5 min。
8. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸團塊。
9. 選 RNA 復溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

氯化鈉

5M 氯化鈉 DNA&RNA 沉淀；目錄號：40-5134-05

1. 無需調節 pH 值。
2. 高洗滌劑含量溶液中的選鹽。SDS 可溶于 70% 乙醇，確保無洗滌劑 DNA 沉淀。

用途：0.3 M 氯化鈉終濃度和 2-2.5 體積乙醇濃度≥500 ng/mL 時 DNA 或 RNA 的常規沉淀

1. 加入 5M 氯化鈉至終濃度 0.3M。
2. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
5. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
7. 風干顆粒 5 min。
8. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸沉淀
9. 選 RNA 復溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

乙酸銨：7.5M 醋酸銨 DNA&RNA 沉淀液；目錄號：40-5135-05

1. 揮發性溶液，請勿高壓滅菌。
2. 高 dNTP 和寡糖含量溶液中的選鹽，因為這些物質仍保留在溶液中。
3. 如果作為銨離子的激酶化抑制多核苷酸激酶，則避免使用。
4. 2.5M 乙酸銨與乙醇沉淀 DNA，而碳水化合物和 dNTP 保留在溶液中。

用途：2.5 M 乙酸銨終濃度和 2.5 體積乙醇用于 RNA 濃度≥20 ng/mL 時 DNA 或 RNA 的常規沉淀

1. 加入 0.5 體積的 7.5 M 乙酸銨。渦旋。
2. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min
3. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
4. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
6. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
7. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
8. 風干顆粒 5 min。
9. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸團塊。
10. 選 RNA 復溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

乙酸銨：5M 醋酸銨 DNA&RNA 沉淀液；目錄號：40-5136-05

1. 揮發性溶液，請勿高壓滅菌。
2. 高 dNTP 和寡糖含量溶液中的選鹽，因為這些物質仍保留在溶液中。
3. 如果作為銨離子的激酶化抑制多核苷酸激酶，則避免使用。
4. 2.5M 乙酸銨與乙醇沉淀 DNA，而碳水化合物和 dNTP 保留在溶液中。

用途：2.5 M 乙酸銨終濃度和 2.5 體積乙醇（用于 RNA）

濃度≥20 ng/mL 時 DNA 或 RNA 的常規沉淀

1. 加入 1 體積 5 M 乙酸銨。渦旋。
2. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min
3. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
4. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
6. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
7. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
8. 風干顆粒 5 min。
9. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸沉淀
10. 選 RNA 復溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

LiCl RNA 沉淀溶液：(7.5M LiCl，50 mM EDTA pH 8.0)；目錄號：40-5131-05

不得用于小于 300 個核苷酸的 RNA 的沉淀。

終濃度為 2.5M 的 LiCl 在不添加乙醇的情況下可有效沉淀大于 300 個核苷酸的 RNA，這種沉淀方法選擇性沉淀 RNA，不能有效沉淀 DNA、蛋白質或碳水化合物 (Barlow et al.,1963)。它是去除 RNA 制劑中翻譯或 cDNA 合成抑制劑的選方法 (Cathala et al.,1983)。同時為從體外轉錄反應中回收 RNA 提供了一種簡單快速的方法。4 ℃、12K rpm 離心 20 min，可定量回收低至 50 ng 的 RNA。

用途：在不添加乙醇或異丙醇的情況下，對 2.5 M 氯化鋰進行終濃縮。濃度≥100 ng/mL 時 RNA 的常規沉淀。

1. 加入 0.5 體積的 7.5 MLiCl。（請勿添加乙醇）
2. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
3. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
4. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
6. 風干顆粒 5 min。
7. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 或 1 mM 檸檬酸鈉 pH 6.4 中重懸團塊。
8. 選 RNA 復溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

參考文獻

1. Okayama,H.&Berg,P. (1982)摩爾細胞生物學2、161-170，高效克隆全長 cDNA。
2. Wallace,D.M. (1987)方法酶。152、41-48、核酸的沉淀。
3. Ausubel,F.A.,Brent,R.,Kingston,R.E.,Moore,D.D.,Seidman,J.G.,Smith,J.A.&Struhl,K. (eds.)（1995 年）當前分子生物學方案，第 15.3.1-4 頁（增刊17）Greene Publishing&Wiley-Interscience,New York.
4. Saporito-Irwin,S.M.等人. (1997) 生物技術23，424-427，質粒 DNA 的制備方案，適用于哺乳動物細胞的轉染。
5. Gaillard、C 和 F Strauss。“以線性聚丙烯酰胺為載體的 DNA 乙醇沉淀。”核酸研究18,no. 2（1990 年 1 月）:378.
6. Barlow,J J,A PMathias,R Williamson,and DB Gammack.“一種定量分離未降解高分子量核糖核酸的簡單方法。”生物化學。生物物理學。共存研究13 (1963): 61-66.
7. Cathala,G 等人“完整、翻譯活性核糖核酸的分離方法。”DNA2 (1983): 329-335.

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僅供研究使用。不適用于診斷或臨床程序。

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