genaxxon M3009.0000說明書

SNP Pol DNA-Polymerase

M3009.0000

產品信息“ SNP Pol DNA聚合酶”

SNP Pol DNA聚合酶用于等位基因的簡單，可靠和快速特異性分化，例如。CRISPR / Cas9點突變，檢測不正確的CRISPR / Cas9產品，或驗證測序結果。無論是否存在引物模板復合物不匹配，SNP Pol DNA聚合酶都能識別高度特異性。錯配（點突變）必須在引物的3'末端。因此，突變等位基因可以與野生型等位基因*區分開- 無需測序，因為在錯配的情況下聚合酶根本不會擴增。

只需將引物放在假定的點突變上（重要：點突變必須在3'末端），聚合酶將以100％的準確性檢測該區域的錯配：如果與引物3'末端互補的堿基在DNA上鏈顯示突變而引物未顯示，則沒有擴增發生-快速100％確定！
因此，SNP Pol DNA聚合酶可輕松，省時且經濟地用于篩選點突變。

SNP PolTaq DNA聚合酶變異體具有5'-3'核酸酶活性，因此可與特異性引物探針（如Taqman®探針或分子信標）一起使用。

一次性測試模式可享受*。在德國境內免運費！試用樣品價格將在產品正式訂購時退還。

描述
的SNP波爾DNA聚合酶（您好 GH 狄單核苷酸scrimination）是高度選擇性的DNA聚合酶。它是專為需要較高區分率的等位基因特異性區分而設計的，例如等位基因特異性PCR（ASA），等位基因特異性引物延伸（AS-PEX），SNP分析，基因分型或甲基化特異性PCR（MSP）。許多DNA聚合酶可耐受錯配的引物-模板復合物。另一方面，SNP Pol DNA聚合酶可以區分這些特異性（高區分度），并且僅特異性地提供引物對*匹配的PCR產物！Genaxxon SNP Pol和SNP PolTaq DNA聚合酶通過兩個等位基因之間的等位基因特異性PCR差異高達100％，并且在簡單的qPCR之后，可以清楚地說明存在哪些等位基因。

等位基因特異性PCR可用于定量野生型序列庫或背景中的突變率。同樣，可以通過等位基因特異性PCR和SNP Pol DNA聚合酶驗證由NGS確定的突變頻率。SNP PolTaq DNA聚合酶非常適合用于液體活檢樣品的分析。有了它，就可以很好地分析和量化癌癥突變的存在和頻率。

圖片：應用實例SNP Pol DNA聚合酶

我們建議使用短擴增子（約60-200 bp）的引物以獲得良結果。更長的擴增子也是可能的。
對于大于500 bp的較長擴增子，可能需要添加鎂（+0.5-1.5mM）。

故障排除：
PCR 30個循環后無條帶！
缺失或弱帶的優化程序

-實時PCR方法
-檢查dNTP濃度。這應該在200至300μM之間（在PCR中）。
-增加循環次數（至少35次，宜40次）

測試優化- 
循環數在端點檢測中，循環數30并不總是足以產生高度可見的條帶。例如，以少于200個DNA拷貝為基線。因此，應該使用實時PCR運行測試，或者可以使用五個并行PCR，其中五個是在五個不同的循環后從PCR設備中提取的（以下示例）。

終點檢測：
用SNP Pol DNA聚合酶并行進行五個相同的PCR反應。
分別在20、25、30、35和40個循環中，從循環儀中取出一個PCR管，后將所有五個反應加到瓊脂糖凝膠上。
這樣就可以很容易地看出，對于給定的應用（起始材料，靶標，引物），PCR中宜的循環數是多少。

帶細胞裂解物的SNP Pol PCR
動物細胞和大腸桿菌可直接用于SNP Pol DNA聚合酶的PCR！不需要單獨的裂解和蛋白酶K消化。
程序PCR方法：

1.每個PCR方法需要50-500個細胞！
2.用引物和緩沖液準備PCR混合物，并置于冰上！
3.將挑選的菌落直接倒入10-20μL水中（不進行單獨的裂解，不進行蛋白酶K消化），
短暫渦旋（5秒），然后將該細胞懸液直接加入PCR反應中，例如將
10μL的細胞懸液用于PCR總體積接近20μL。2-3分鐘的初始變性時間
就足夠了，如果需要，可以延長至5分鐘。
每個反應的大基因組DNA。100份相對較小，但仍然可以使用。
該細胞懸浮液的其余部分也可以冷凍掉以進行進一步測試。

可選： 
4.如果可能：進行實時PCR！

SNP Pol DNA聚合酶（M3009>）或（M3061>）可與非特異性熒光染料（例如Genaxxon的Green DNA Dye>或SybrGreen®）一起用于實時PCR。當使用特定的PCR探針時，只能使用SNP PolTaq DNA聚合酶，因為只有這種酶才具有5'-3'核酸外切酶活性。

使用我們高質量的dNTP套裝（M3015.4100和M3015.0250）或混合物（M3016.1010）>或我們的DNA標記>以及我們有利的標準瓊脂糖>，我們為您提供PCR的其他產品。

SNP Pol DNA聚合酶的應用領域
-監測，驗證和檢測點突變
-鑒定正確或錯誤的CRISPR / Cas9產品
-驗證/確認測序結果
-定量突變（例如NGS結果）
-通過等位基因檢測SNP特異性擴增（ASA）/等位基因特異性PCR- 
亞硫酸氫鹽處理過的DNA（CpG甲基化側）后的甲基化特異性PCR（MSP）
-HLA基因分型
-微測序
-帶有水解探針的實時PCR- 
實時多重PCR

- 線蟲DAMID-SEQ數據。

Sharma R，Ritler D，Meister P. 
秀麗隱桿線蟲發育過程中核組織的DNA腺嘌呤甲基轉移酶鑒定分析工具。創世紀。2016年2月4日。doi：10.1002 / dvg.22925。

-用SNPase DNA聚合酶進行SNP基因分型的小測序可通過以下步驟進行：

Lovmar L，Fredriksson M，Liljedahl U，Sigurdsson S，SyvänenAC。
通過微測序和微陣列的定量評估揭示了整個基因組擴增DNA的準確多重SNP基因型。Nucleic Acids Res。2003; 31：e129 。

-HiDi DNA聚合酶的等位基因特異性錯配選擇性

鼓M，Kranaster R，Ewald C，Blasczyk R，Marx A（2014）Thermus aquaticus DNA聚合酶的變體，具有在等位基因和甲基化特異性擴增中應用的增加的選擇性。公共科學學報9（5）：e96640。DOI：10.1371 / journal.pone.0096640