Biolegend公司的試劑主要包括細(xì)胞免疫、細(xì)胞因子、趨化因子、粘附因子等與癌癥研究、T調(diào)節(jié)細(xì)胞研究、干細(xì)胞研究、先天免疫研究、細(xì)胞周期分析、凋亡研究及特定修飾類(lèi)抗體等領(lǐng)域相關(guān)的試劑，用于流式、ELISA、免疫沉淀、WB、免疫熒光、免疫組化及體內(nèi)體外功能學(xué)試驗(yàn)。其中，Biolegend公司的流式抗體以其具有較寬范圍的熒光選擇及較高的性?xún)r(jià)比，為廣大科研工作者所接受！同時(shí)，公司配備了一支經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)服務(wù)隊(duì)伍，為客戶(hù)提供的配色方案及快速的售后處理服務(wù)！

biolegend 640952說(shuō)明書(shū)

APC / Fire™750 Annexin V.

其他名稱(chēng)   Annexin A5

描述

膜聯(lián)蛋白V（或膜聯(lián)蛋白A5）是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的膜聯(lián)蛋白家族的成員，其以鈣依賴(lài)性方式結(jié)合磷脂酰絲氨酸（PS）。PS通常僅在健康細(xì)胞中的質(zhì)膜細(xì)胞內(nèi)小葉上發(fā)現(xiàn)，但在早期細(xì)胞凋亡期間，膜不對(duì)稱(chēng)性喪失并且PS易位至外部小葉。然后熒光染料標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白V可用于特異性靶向和鑒定凋亡細(xì)胞。Annexin V結(jié)合緩沖液（目錄號(hào)422201）推薦用于膜聯(lián)蛋白V染色。單獨(dú)的膜聯(lián)蛋白V結(jié)合不能區(qū)分凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。因此，我們建議使用我們的Helix NP™Blue（目錄號(hào)425305），Helix NP™Green（目錄號(hào)425303）或Helix NP™NIR（目錄號(hào)425301）。早期凋亡細(xì)胞將排除7-AAD和PI，

人T白血病細(xì)胞系Jurkat，用BioLegend的抗人CD95（EOS9.1）mAb（cat.305704）在37℃處理（左）或未處理（右）4小時(shí)，然后用膜聯(lián)蛋白V-APC染色/ Fire TM 750和Helix NP Green（cat.425303,1.25nM）在37℃下在膜聯(lián)蛋白結(jié)合緩沖液中15分鐘。 

產(chǎn)品詳情：

反應(yīng)

所有哺乳動(dòng)物物種

公式

磷酸鹽緩沖溶液，pH 7.2，含有0.09％Sodium azide和0.2％（w / v）BSA（來(lái)自美國(guó)）。

制備

通過(guò)親和層析純化抗體，并在適宜條件下與APC / Fire TM 750綴合。該溶液不含未綴合的APC / Fire TM 750和未綴合的抗體。

濃度

批次特定（請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以獲得濃度和總μg量，或者如果您有批號(hào)，請(qǐng)使用我們的查找工具。）

存儲(chǔ)和處理

抗體溶液應(yīng)在2°C至8°C之間進(jìn)行稀釋?zhuān)⒈苊忾L(zhǎng)時(shí)間暴露在光線(xiàn)下。不要凍結(jié)。

應(yīng)用

FC - 質(zhì)量測(cè)試

推薦用法

通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析的免疫熒光染色對(duì)該產(chǎn)品的每批產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制測(cè)試。對(duì)于流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用，建議在100μl體積的膜聯(lián)蛋白V結(jié)合緩沖液（目錄號(hào)422201）中使用該試劑為每100,000,000,000個(gè)細(xì)胞5-15μg。建議滴定試劑以獲得每種應(yīng)用的良性能。

* APC / Fire™750的大激發(fā)波長(zhǎng)為650 nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為787 nm。

激發(fā)激光

紅色激光（633 nm）

應(yīng)用筆記

膜聯(lián)蛋白V染色 
1.用冷BioLegend細(xì)胞染色緩沖液（目錄號(hào)420201）洗滌細(xì)胞兩次，然后以1×10 ⁶  細(xì)胞/ ml 的濃度將細(xì)胞重懸于膜聯(lián)蛋白V結(jié)合緩沖液（目錄號(hào)422201）中。
2.將100μl細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到5ml試管中。
3.加入5μlAPC/ Fire TM 750膜聯(lián)蛋白V. 
4.加入10μlPI溶液（目錄號(hào)421301）或7-AAD（目錄號(hào)420403/420404）。 
5.輕輕渦旋細(xì)胞，在室溫（25°C），黑暗中孵育15分鐘。 
6.向每個(gè)管中加入400μl膜聯(lián)蛋白V結(jié)合緩沖液（目錄號(hào)422201）。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析。

申請(qǐng)參考

（PubMed鏈接表示BioLegend引文）

1. Koopman G，et al。1994年血液 84：1415。
2. Vermes I，et al。1995. J. Immunol。方法 184：39。
3. Dachary-Prigent J，et al。1993. Blood 81：2554。
4. Sekine C，et al。2009. Int Immunol。
5. Grujic M，et al。2010. J. Immunol。185：1730

抗原詳細(xì)信息

生物學(xué)領(lǐng)域

細(xì)胞凋亡/腫瘤抑制因子/細(xì)胞死亡，細(xì)胞生物學(xué)，神經(jīng)科學(xué)

相關(guān)常見(jiàn)問(wèn)題

我可以?xún)鼋Y(jié)膜聯(lián)蛋白V結(jié)合物嗎？

它不應(yīng)該被凍結(jié)，因?yàn)樗鼤?huì)導(dǎo)致由于二聚化而喪失生物活性。

膜聯(lián)蛋白V染色期間可以使用RPMI嗎？

遵循產(chǎn)品數(shù)據(jù)表中所述的協(xié)議。此外，RPMI 1640具有相對(duì)高濃度的磷酸鹽和低鈣離子濃度，這對(duì)膜聯(lián)蛋白與其目標(biāo)磷脂酰絲氨酸（PS）的結(jié)合產(chǎn)生負(fù)面影響。使用膜聯(lián)蛋白V測(cè)量細(xì)胞死亡也可能受到冰上孵育時(shí)間，鈣濃度和培養(yǎng)基類(lèi)型的顯著影響。

pH和染色溫度如何影響膜聯(lián)蛋白V-磷脂酰絲氨酸的結(jié)合？

膜聯(lián)蛋白 - 磷脂酰絲氨酸結(jié)合在pH 5.2以下并且在42℃的溫度下延長(zhǎng)孵育時(shí)丟失。

您的Annexin是如何制作的以及它涵蓋的序列是什么？

它在大腸桿菌中制備，覆蓋人aa Met1-Asp320。

Annexin V是否適合與CytoF®的Maxpar®試劑盒結(jié)合使用？

Maxpar®標(biāo)記試劑盒需要部分還原蛋白質(zhì)，因此可以通過(guò)還原抗體鉸鏈區(qū)的SH基團(tuán)引入金屬螯合物。人膜??聯(lián)蛋白V僅含有一個(gè)半胱氨酸，據(jù)報(bào)道它是化學(xué)惰性的。因此，Maxpar®標(biāo)簽協(xié)議不會(huì)與膜聯(lián)蛋白V工作，除非一個(gè)自由的-SH基團(tuán)可以引入到膜聯(lián)蛋白V.有關(guān)膜聯(lián)蛋白V請(qǐng)咨詢(xún)發(fā)表論文像這樣的SH-介導(dǎo)的共軛更多信息一個(gè)。

為什么我需要使用Annexin V Binding Buffer？

膜聯(lián)蛋白V結(jié)合需要溶液中存在鈣。因此，我們提供Annexin V結(jié)合緩沖液（目錄號(hào)422201），它針對(duì)膜聯(lián)蛋白V染色的良性能進(jìn)行了優(yōu)化。