immuquest IQ580說明書

橋粒芯蛋白2抗體[7H9]

使用橋粒芯蛋白2抗體[7H9]在A431細(xì)胞裂解物上進(jìn)行Western印跡

目錄號：IQ580

£226.00

目標(biāo)抗原

Desmoglein 2

主要說明

小鼠抗橋粒芯糖蛋白2 [7H9]

目錄編號

IQ580

數(shù)量

0.1毫升

濃度

1mg / ml的

克隆

7H9

主辦

老鼠

同型

的IgG1

免疫原

人橋粒芯糖蛋白-2的氨基酸37-164與GST融合

骨髓瘤/融合伴侶

NS1骨髓瘤

物種反應(yīng)性

人的

純化

蛋白A親和色譜

格式

純化的抗體含有PBS + 0.1％疊氮化NA

應(yīng)用

WB，ICC / IF

稀釋液

宜抗體稀釋應(yīng)通過滴定確定，但作為指導(dǎo)起點(diǎn)

WB 1：100 160 kDa波段（特別識別橋粒芯糖蛋白-2的前體區(qū)域）

參考

Keim，S。等。人。針對人橋粒芯糖蛋白-2前體的單克隆抗體的產(chǎn)生和表征。雜交瘤卷 27號：249-258（2008）PUBMED

數(shù)據(jù)庫鏈接

Entrez基因：1829  人類

Entrez Gene：13511  鼠標(biāo)

Omim：125671  人類

SwissProt：Q14126  人類

SwissProt：O55111  鼠標(biāo)

Unigene：412597  人類

Unigene：345891  鼠標(biāo)

也稱為

ARVC 10抗體; ARVC10抗體; ARVD 10抗體; ARVD10抗體; Cadherin家族成員5抗體; CDHF 5抗體; CDHF5抗體; CMD1BB抗體; Desmoglein 2抗體

本產(chǎn)品僅供研究使用。不用于治療或診斷用途。

細(xì)胞間橋粒連接的組成部分。參與斑塊蛋白和介導(dǎo)細(xì)胞 - 細(xì)胞粘附的中間絲的相互作用

免疫熒光方案 - 甲醛固定

   1.從Tcunit收集細(xì)胞，并用吸力從培養(yǎng)皿中取出培養(yǎng)基。
   2.用1x PBS洗滌并取出。
   3.在室溫下在軌道振蕩器上將細(xì)胞在預(yù)熱（37℃）對甲醛中孵育12分鐘。
   4.去除PFA并在室溫下在1x PBS中的0.5％Triton X-100中孵育5分鐘。
   5.準(zhǔn)備封閉試劑，這也是抗體稀釋劑。
   6.在室溫下用1x PBS洗滌細(xì)胞2次，在軌道振蕩器上洗滌4分鐘/洗滌。
   7.在室溫下用1％NCS和1x PBS封閉30分鐘。
   8.準(zhǔn)備一抗（50μl/蓋玻片）和濕潤染色室。
   9.在室溫下用1x PBS洗滌細(xì)胞2次并短暫風(fēng)干。
  10.在室溫下在黑暗的染色室中與一抗孵育1小時。在此期間準(zhǔn)備二抗。
  11.用1x PBS洗滌細(xì)胞5次（每個燒杯更換5個燒杯/ 5個計(jì)數(shù)）
  12。在室溫下在黑暗的染色室中與第二抗體孵育1小時。
  13.用1x PBS洗滌細(xì)胞5次。
  14.登上達(dá)皮。

溶液（染色當(dāng)天新鮮制備）。

    * 1x磷酸鹽緩沖鹽水。
    *封閉試劑：1x PBS中1％NCS（使用新鮮的10x PBS）。
    *固定液：3.5％對甲醛。

1.75g PFA在20ml d.H2O中加5滴1M NaOH。在50-60℃的熱板上攪拌直至溶解。加入4滴IN HCl并檢查pH指示條。PH值應(yīng)為7.4。完成體積，d.H20至25ml，加入25ml 2xPBS。在添加到蓋玻片之前檢查pH值。


免疫熒光方案 - 甲醇/丙酮固定

   1.從TCunit收集細(xì)胞，并用吸力從培養(yǎng)皿中取出培養(yǎng)基。
   2.用1x PBS洗滌并取出。
   3.用冷甲醇：丙酮1：1在冰上固定細(xì)胞10分鐘。
   4.制備阻斷試劑，這也是抗體的稀釋劑。
   5.取出固定劑并在室溫下用1x PBS洗滌細(xì)胞3次，在軌道振蕩器上洗滌4分鐘。
   6.在室溫下用1％NCS和1x PBS封閉30分鐘。
   7.準(zhǔn)備一抗（50？l /蓋玻片）和濕染色室。
   8.在室溫下用1x PBS洗滌細(xì)胞2次并風(fēng)干約7分鐘。
   9.在室溫下在室溫下與一抗孵育1小時，在染色室中避光。在此期間準(zhǔn)備二抗。
  10.用1x PBS洗滌細(xì)胞5次（每個燒杯更換5次燒杯/ 5次計(jì)數(shù)）
  11。在室溫下，在染色室的黑暗中與第二抗體孵育1小時。
  12.用1x PBS洗滌細(xì)胞5次。
  13.登上達(dá)皮。

溶液（染色當(dāng)天新鮮制備）

    * 1x磷酸鹽緩沖鹽水。
    *封閉試劑：1x PBS中1％NCS（使用新鮮的10x PBS）。
    *固定液：甲醇：丙酮1：1冰冷。



Western Blotting Protocol

   1.將凝膠轉(zhuǎn)移到PDVF或硝酸纖維素膜上
   2.將膜置于封閉緩沖液中的塑料托盤中攪拌1小時
   3.在洗滌緩沖液中沖洗
   4.在洗滌緩沖液和一抗中孵育1小時
   5.洗滌6次X用洗滌緩沖液洗滌5分鐘
   6.在洗滌緩沖液和二抗中孵育1小時
   7.用洗滌緩沖液洗滌6X 5分鐘
   8.檢測（例如ECL，Amersham根據(jù)制造商的說明）

洗滌緩沖液
PBS + 0.1％Tween 20 

阻斷緩沖液
洗滌緩沖液+ 5％奶粉

所用抗體的濃度取決于每種抗體，抗原的量和所用的檢測方法。通常，稀釋在稀釋的幾百倍稀釋到幾千倍的范圍內(nèi)，但通常必須憑經(jīng)驗(yàn)確定。