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PhyNexus 蛋白質G PhyTip柱說明書

Protein G PhyTip Columns

蛋白質G PhyTip柱

蛋白質G PhyTip柱顯示功能性抗體（IgG）的高結合親和力和高選擇性親和純化。蛋白G柱顯示出對不同同種型和IgG種類的高選擇性，并獲得高度濃縮的純化蛋白

• 高結合親和力
• 對不同物種的高選擇性和抗體的同種型
• IgG回收率為70-90％

使用我們專有的雙流式色譜法  提供的蛋白G提示可  提供完整的抗體結合和高終濃度。PhyTip色譜柱兼容大多數8,12和96通道自動化液體處理機器人，包括  Agilent Technologies，  Beckman Coulter，  Dynamic Devices，  Perkin Elmer，  Hamilton和  Tecan。

含有蛋白G的PhyTip色譜柱

含有蛋白G的PhyTip色譜柱已經過優化，可用于特定的PhyNexus試劑和儀器流速/體積，如下所示。使用PhyTip ME 1000和ME 200純化系統收集該信息

所有帶有蛋白G的PhyTip色譜柱都配有推薦的PhyTip緩沖液，包括：捕獲緩沖液 - 適用于需要添加額外緩沖液以補充樣品體積并確保正確捕獲pH值的情況。洗滌緩沖液I - 磷酸鹽緩沖溶液pH 7.4洗滌緩沖液II - 鹽水溶液。注意：沒有緩沖能力以確保有效洗脫富集緩沖液 - 用于終洗脫步驟 - 磷酸鹽緩沖溶液pH 2.5中和緩沖液。 - Tris緩沖溶液pH 9.0

注意：富集緩沖液以4 mL pH 2.5磷酸鹽緩沖溶液的形式提供，如果要純化的蛋白質需要較少的酸性洗脫條件，例如pH 2.8，則可以如下更改富集緩沖液的pH值：取1 mL標準富集緩沖液（pH值） 2.5）加入30μL1MTris Buffer標準中和緩沖液，得到1 mL pH 2.8洗脫緩沖液（實際pH值可能因體積精度而異）對于pH 3.0濃縮緩沖液，取1 mL標準富集緩沖液（pH 2.5） ）加入40μL1MTris Buffer標準中和緩沖液，得到1 mL pH 3.0洗脫緩沖液（實際pH值可能因體積精度而異）

對于中和步驟，添加25％v / v的洗脫體積，例如，如果洗脫體積為20μL，則添加5μL的1M Tris中和緩沖液

含有蛋白G樹脂的200多個PhyTip色譜柱：

對于含有1mg BSA的5μgIgG2a（抗FITC MAb。）的200μL樣品，使用下面顯示的條件處理，在終樣品體積中回收大于40％的原始IgG質量。此外，通過用考馬斯檢測的SDS-PAGE測定，回收的IgG純度超過95％。

捕獲：通過樹脂床以250μL/分鐘的流速通過樹脂床捕獲200μL樣品。

純化：200μLPhyNexusProtein G洗滌緩沖液I，以500μL/ min的流速通過樹脂床兩個循環，然后用洗滌緩沖液II進行第二次洗滌，在樹脂床上通過兩個循環流動速率為500μL/ min。

富集：用10μLPhyNexusProtein G Enrichment Buffer將蛋白質洗脫到溶液中，以500μL/ min的流速通過樹脂床5個循環。用3μLPhyNexus蛋白G中和緩沖液中和。

出廠時含有的蛋白G富集緩沖液含有：111mM NaH2PO4,140mM NaCl，14.8mM H3PO4，pH3.0

含有蛋白G樹脂的1000多種PhyTip色譜柱：

對于含有5μgBSA的10μgIgG2a（抗FITC MAb。）的500μL樣品，使用下面顯示的條件處理，在終樣品體積中回收大于40％的原始IgG質量。此外，通過用考馬斯檢測的SDS-PAGE測定，回收的IgG純度超過95％。

捕獲：通過樹脂床以250μL/分鐘的流速通過四個循環捕獲500μL樣品。

純化：1000μLPhyNexusProtein G洗滌緩沖液I，以500μL/ min的流速通過樹脂床兩個循環，然后用洗滌緩沖液II進行第二次洗滌，以500的流速通過樹脂床兩個循環。 μL/分鐘。

富集：用15mL PhyNexus Protein G Enrichment Buffer將蛋白質洗脫到溶液中，以500μL/ min的流速通過樹脂床5個循環。用5μLPhyNexus蛋白G中和緩沖液中和。

PhyTip色譜柱是PhyNexus*的捕獲，純化和富集TM工具，專為微量蛋白質樣品制備而設計。PhyTip色譜柱適用于各種液體處理平臺，并含有特定的親和樹脂，可滿足特定應用要求。

PhyNexus建議使用含有IgG的PhyTip入門試劑盒作為標準，以驗證所有應用中PhyTip色譜柱的使用。

用于純化和富集的樣品必須清澈且無顆粒物質。在與PhyTip色譜柱一起使用之前，強烈建議離心樣品并僅使用澄清的上清液。

運輸和存儲

每包PhyTip色譜柱均按照高標準生產和質量控制，并在保留盒中運輸，以保持每個PhyTip色譜柱中特定親和樹脂的完整性。本產品在環境溫度下運輸，但收到后應存放在4到8℃的標準實驗室冰箱中。

• 不要冷凍或儲存冷凍。
• 不使用時，請將盒蓋關閉并密封，存放在冰箱中。
• 在干燥環境中長時間儲存??，不要讓親和樹脂干燥。

含有蛋白G的PhyTip色譜柱在從PhyNexus發貨時儲存在甘油中。

Protein G PhyTip色譜柱可用于這些機器人系統。